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【求助】PCR产物电泳没有条带

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【求助】PCR产物电泳没有条带
有条带的是换了试剂盒后的β-actin,其余的都是目的基因的

我做了好多遍了,我用的是Fermentas的试剂盒,结果什么都没有!只有Marker有条带,我开始怀疑是cDNA不好,用核酸检测仪检测浓度19ng/ul,然后以为是加样问题,就重做,结果也没有,然后换了一个公司的试剂盒,β-actin跑出来了,但是目的基因还是没有,有一个基因条带很淡很淡,我以为是cDNA加得太少,就多加了一倍的的cDNA,结果还是什么也没有,郁闷中!下面是我的体系:
DreamTaqpcr Master Mix(含dNTP、缓冲液和Mg离子的)                   25ul
上游引物(10uM)                                                                                1.5ul
下游引物(10uM)                                                                                 1.5ul
cDNA(19ng/ul)                                                                                    1ul或者2ul
无酶水                                                                                                     补足50ul
另外一个试剂盒体系:
Taq酶buffer                                                                           12.5ul
上游引物(10uM)                                                                1.5ul
下游引物(10uM)                                                                1.5ul
cDNA(19ng/ul)                                                                   0.5ul
Taq酶                                                                                    0.5ul
无酶水                                                                                   补足25ul
PCR仪条件都一样
预变性                95℃                   3min
变性                    95℃                   30s
退火温度             50-65℃              30s
延伸                     72℃                   40s
循环40个
最终延伸               72℃                  8min
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β-actin1.jpg


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  • dog002 (2015-4-30 15:37:38)

    图2


    VMAT3.jpg

  • dog002 (2015-4-30 15:37:58)

    图3


    3.jpg

  • dog002 (2015-4-30 15:38:15)

    图4


    4.jpg

  • dog002 (2015-4-30 15:38:32)

    图5


    5.jpg

  • dog002 (2015-4-30 15:38:51)

    图6


    6.jpg

  • dog002 (2015-4-30 15:39:08)

    图7


    7.jpg

  • dior (2015-4-30 15:41:10)


    最近也在为这头痛...
    下面个体系貌似没加dNTP
    实在P不出,可以考虑下引物问题
  • vvmmoy (2015-4-30 15:41:24)


    唉,我这两天也P不出来,我怀疑是自己的引物不符合……
  • qianqin1977 (2015-4-30 15:41:48)

    那个buffer里面有dNTP
  • any333 (2015-4-30 15:42:03)


    可能是引物问题!
  • chengjie79 (2015-4-30 15:42:22)

    你的图片里有很多是有条带的,只是不明显!
  • jude (2015-4-30 15:42:43)


    退货温度设置50度,这样引物比较容易连接上。变性设98度10秒。延伸设72度1分钟。试试看。
  • dog002 (2015-4-30 15:43:12)

    啊?我怎么没看见?
  • feiya (2015-4-30 15:45:04)

    换个公司合成引物,比如上海生工、英俊、三博或白奥康都可以。
  • yes4 (2015-4-30 15:45:46)

    哇 幸好没做分子
  • yes4 (2015-4-30 15:47:55)


    放轻松 从头到尾再想一遍
  • whitesheep (2015-4-30 15:48:17)

    我也遇到这样的问题,烦死我了,一连做了好几次都是这种结果,后来由一个有结果,但是送检菌落去测序得来的序列与参考序列比对竟然不是同一种东西。郁闷死咯!!唉。。
  • dog002 (2015-4-30 15:48:35)

    我就是上海生工的引物
  • xevin (2015-4-30 15:53:18)


    也许可以增加一下你电泳的上样量试试。感觉第一张图有P出来东西。或者你增加以下你模板的量。引物1ul试试
  • newway (2015-4-30 15:53:37)


    也许可以增加一下你电泳的上样量试试。感觉第一张图有P出来东西。或者你增加以下你模板的量。引物1ul试试
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