【求助】PCR产物电泳没有条带
我做了好多遍了,我用的是Fermentas的试剂盒,结果什么都没有!只有Marker有条带,我开始怀疑是cDNA不好,用核酸检测仪检测浓度19ng/ul,然后以为是加样问题,就重做,结果也没有,然后换了一个公司的试剂盒,β-actin跑出来了,但是目的基因还是没有,有一个基因条带很淡很淡,我以为是cDNA加得太少,就多加了一倍的的cDNA,结果还是什么也没有,郁闷中!下面是我的体系:
DreamTaqpcr Master Mix(含dNTP、缓冲液和Mg离子的) 25ul
上游引物(10uM) 1.5ul
下游引物(10uM) 1.5ul
cDNA(19ng/ul) 1ul或者2ul
无酶水 补足50ul
另外一个试剂盒体系:
Taq酶buffer 12.5ul
上游引物(10uM) 1.5ul
下游引物(10uM) 1.5ul
cDNA(19ng/ul) 0.5ul
Taq酶 0.5ul
无酶水 补足25ul
PCR仪条件都一样
预变性 95℃ 3min
变性 95℃ 30s
退火温度 50-65℃ 30s
延伸 72℃ 40s
循环40个
最终延伸 72℃ 8min
【求助】PCR产物电泳没有条带
β-actin1.jpg
最新回复
dog002 (2015-4-30 15:37:38)
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dior (2015-4-30 15:41:10)
最近也在为这头痛...
下面个体系貌似没加dNTP
实在P不出,可以考虑下引物问题
vvmmoy (2015-4-30 15:41:24)
唉,我这两天也P不出来,我怀疑是自己的引物不符合……
qianqin1977 (2015-4-30 15:41:48)
any333 (2015-4-30 15:42:03)
可能是引物问题!
chengjie79 (2015-4-30 15:42:22)
jude (2015-4-30 15:42:43)
退货温度设置50度,这样引物比较容易连接上。变性设98度10秒。延伸设72度1分钟。试试看。
dog002 (2015-4-30 15:43:12)
feiya (2015-4-30 15:45:04)
yes4 (2015-4-30 15:45:46)
yes4 (2015-4-30 15:47:55)
放轻松 从头到尾再想一遍
whitesheep (2015-4-30 15:48:17)
dog002 (2015-4-30 15:48:35)
xevin (2015-4-30 15:53:18)
也许可以增加一下你电泳的上样量试试。感觉第一张图有P出来东西。或者你增加以下你模板的量。引物1ul试试
newway (2015-4-30 15:53:37)
也许可以增加一下你电泳的上样量试试。感觉第一张图有P出来东西。或者你增加以下你模板的量。引物1ul试试
【求助】PCR产物电泳没有条带